UMA INICIATIVA:
Procedimento
Procedimento geral
- Os 8 tubos a utilizar para diluição têm 9 mL de PBS (à semelhança do dia 1)
- As culturas iniciais a utilizar vêm do Dia 1 - tubos "Grupo A" e "Grupo B", respectivamente.
Diluições nas Placas com Agar
No Dia 2 ambos os grupos de trabalho irão preparar placas com agar, com e sem ampicilina, utilizando para isso diferentes diluições da cultura de bactérias preparadas no dia anterior.
Porque são utilizadas diferentes diluições?
As diluições maiores são utilizadas quando se espera que haja um elevado nº de bactérias, para facilitar a sua contagem.Que diluições utilizar?
O procedimento-tipo diz-nos para fazermos, no Dia 2, as diluições iguais no Grupo A e Grupo B; o que se pode ver pela tabela-tipo colocada para preenchimento.
- para grupo A
- placa 1 (-AP) – cunhas de -6 a -10
- placa 2 (+AP) – cunhas de -2 a -6
- para o grupo B
- placa 1 (-AP)– cunhas de -6 a -10
- placa 2 (+AP)– cunhas de -2 a -6
Esta opção irá permitir também a comparação visual entre as placas dos diferentes grupos.
No entanto, o protocolo original propõe para fazermos maiores diluições no Grupo B (esperamos ter um maior nº de bactérias):
- placa 1 (-AP)– cunhas de -6 a -10
- placa 2 (+AP)– cunhas de -6 a -10
Que vem da experiência que tiveram, na utilização de S. marcesens.
É importante compreender que o crescimento das bactérias depende de diversas variáveis, pelo que não existe uma regra infalível para este caso. Nos estudos mais complexos e rigorosos fazem-se placas com as diversas diluições.
Para o nosso caso, o que é importante é que todas as placas estejam sujeitas às mesmas condições e que, na contagem das bactérias, se tenha em atenção às diluições utilizadas. Qualquer que seja a opção seleccionada.
Não esquecer que no final os alunos terão de comparar o nº de colónias obtidas nas placas; isto é, utilizando diluições menores ou maiores, as colónias contadas terão de ser re-calculadas de acordo com as diluições utilizadas.
